蓝白斑筛选的注意事项

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医学上所说的蓝白斑筛选,是基因工程中比较常用的一种细菌重组子的筛选方式。一般在通过人工接入外部基因后,突变了的大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因会被插入的外源基因切断,导致不能转化成完整的β半乳糖苷酶,所以无法对X~gal进行再次切割,故菌落显现为白色。

一、蓝白斑筛选的注意事项:

1、实际操作中发现当插入小片段时,重组子也有形成浅蓝斑的情况.即蓝色菌斑也有可能含外源基因;

2、大概有30%的假阴性. 若形成的白斑很多,但仍不是阳性克隆,需仔细检查你的质粒载体和目的片段连接转化时间温度控制好 避免载体自连并且排除你的酶切插入位点等没有出现设计问题;

3、若用T载体连接,有时会出现蓝白斑,但有时出现全是白斑。

二、蓝白斑筛选的原因:

1、X~gal涂得不够或IPTG加得不够。

2、显色的时间可能不够,延长时间或放入低温冰箱可加强显色。

3、连接产物里面空载的载体本来就极少,这可能是主要原因。


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