近日，中山大学附属第六医院骆衍新、禹汇川团队研发的表观遗传学技术CD8+ MeTIL在英国肿瘤免疫治疗学会会刊Journal for ImmunoTherapy of Cancer（JITC，IF=13.7）发表。这项技术可以精确地定量评估肿瘤微环境中CD8+ T细胞的浸润丰度，为肿瘤微环境的研究领域提供了一种重要的定量观测工具，在肿瘤免疫治疗中具有重要的临床意义。本研究由该院结直肠肛门外科和胃肠病学研究所团队牵头，美国华盛顿大学医学中心、梅奥诊所、加拿大多伦多大学和澳大利亚墨尔本大学协作完成。其中，文章题为“DNA methylation-based signature of CD8+ tumor-infiltrating lymphocytes enables evaluation of immune response and prognosis in colorectal cancer”（肿瘤浸润CD8+淋巴细胞的DNA甲基化图谱可用于评估结直肠癌的免疫反应和治疗结局），该院禹汇川助理研究员和骆衍新主任医师为论文通讯作者，邹齐博士、王小琳助理研究员和任东林教授为论文第一作者。
结直肠癌是全球肿瘤相关死亡的主要原因之一，治疗方法通常包括手术切除、放化疗、靶向治疗以及各种免疫疗法。然而，对这些治疗的反应在患者之间是不同的。例如，PD-1 等免疫检查点抑制剂疗法在肿瘤治疗中取得了进展，但很多患者要么没有反应，要么产生耐药性。
肿瘤微环境中的CD8+ T细胞的数量和功能状态对肿瘤的治疗效果有巨大影响。了解肿瘤微环境中的CD8+ T 细胞数量可以预测治疗中肿瘤的免疫应答，具有实际的临床指导意义。
DNA甲基化为一种可遗传的DNA化学修饰，能够在不改变DNA序列的前提下，产生可遗传性改变。DNA甲基化的动态改变在CD8+ T细胞的分化、成熟和活化中起着关键作用。同时，DNA甲基化具有组织特异性，在不同组织和器官的细胞中有所不同，并有可能成为识别不同细胞的标志物。
中山六院结直肠外科多学科诊疗团队合照
（其中左起第六位为骆衍新主任医师，右起第五位为禹汇川助理研究员）
在这项研究中，团队成员首先构建了CD8+ T细胞特异的DNA甲基化图谱，并在此基础上构建了CD8+ MeTIL细胞分类器。研究团队在DNA甲基化的基础和应用领域进行了多年研究，前期已经开发了一项在单碱基分辨率下检测基因组甲基化水平的分子检测技术及其定量系统QASM（Clinical Chemistry 2019）。应用此项技术，通过三组反应即可快速实现CD8+ MeTIL的检测和肿瘤免疫细胞浸润的定量评估。技术流程易于标准化，经济、时间和人力成本低。多个临床中心的肿瘤标本检测结果显示，CD8+ MeTIL能很好地预测肿瘤免疫检查点阻断剂治疗和肿瘤生存结局，表现出了临床转化应用的潜力和前景。该院研究团队基于这项研究申请了国家发明专利：用于评估组织免疫反应和诊断预后的DNA甲基化检测试剂盒（202011176816.1）。
图 CD8+ T细胞特异的甲基化图谱
图 QASM技术检测CD8+ MeTIL原理和流程
CD8+ MeTIL作为一种数字细胞分类器，可以在表观遗传的水平准确地定量肿瘤微环境中的CD8+ T细胞。与其它组学数据联合分析，将有助于理解表观遗传在CD8+ T细胞分化、活化和抗肿瘤免疫中的作用。CD8+ MeTIL作为生物标志物，能与免疫组化等技术互补，应用于临床，为包括免疫治疗在内的多种治疗方法的选择提供有价值的信息。
（通讯员：简文杨、戴希安、禹汇川）